PAK1 成为依鲁替尼耐药 CLL 的潜在靶点

　　根据提出的研究结果，对依鲁替尼(Imbruvica)耐药细胞和亲本慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞之间三维(3D)染色质组织变化的全基因组研究表明，PAK1作为CLL中的致癌驱动因子的参与在 2021 年 CLL 国际研讨会上。1

　　“总而言之，这些发现表明 PAK1 在 CLL 进展和耐药性中的致癌作用，并表明 PAK1 是一种潜在的诊断标志物和治疗靶点，可提高依鲁替尼耐药的 CLL 患者的治疗效果，”该研究的主要作者吴子娟说。南京医科大学第一附属医院和中国南京江苏省医院血液科和合著者在海报中写道。

　　依鲁替尼是一种有效的、经 FDA 批准的治疗 CLL 患者的药物。然而，一些患者可能会对药物产生获得性耐药，需要联合治疗。

　　染色质的 3D 结构在细胞类型和发育阶段之间是动态和异质的。维持染色质的平衡是疾病预防的关键部分。

　　一项新出现的证据表明，3D 基因组结构的改变在细胞发育和分化、疾病进展和耐药性中起着重要作用。然而，染色质构象在依鲁替尼耐药 CLL 中的重要性尚不清楚。

　　因此，研究人员通过多组学评估了依鲁替尼耐药的分子机制。

　　在该研究中，通过接受增加剂量的依鲁替尼产生了依鲁替尼耐药的 CLL 细胞系。进行了高通量染色体构象捕获 (Hi-C)、转座酶可及染色质分析与高通量测序 (ATAC-seq)、批量 RNA 测序 (RNA-seq) 和串联质量标签 (TMT) 以评估依鲁替尼耐药细胞和亲本细胞之间的差异。

　　来自 53 名 CLL 患者的外周血单核细胞 (PBMC) 被编译用于 RNA-seq。使用海马分析评估线粒体呼吸和糖酵解。所研究药物的生长抑制作用通过 CCK8 测定进行评估，并使用 CompuSyn 软件计算指示协同作用的组合指数 (CI)。用膜联蛋白 V 染色鉴定细胞死亡。

　　Hi-C 分析后，在依鲁替尼耐药细胞和亲本细胞之间观察到染色体的改变，例如 chr11。PAK1，位于 chr11 上，通常过度表达或

　　在大多数癌症类型和疾病进展阶段中过度活化，首先评估其在 CLL 进展和耐药性中的作用。

　　在发生 B 到 A 区室转换的位置发现了 PAK1 致癌基因。与 ATAC-seq、RNA-seq 和 TMT 的结果相似，Hi-C 分析表明，在依鲁替尼耐药的 CLL 细胞中，PAK1 的转录上调。功能分析表明，PAK1 过表达显着促进细胞增殖，而敲低显着抑制细胞活力。细胞活力测定还表明，PAK1 的消耗增加了依鲁替尼的敏感性。此外，PAK1 导致 CLL 细胞中糖酵解和氧化磷酸化的正调节。

　　为了证实测序结果并更好地了解 PAK1 在 CLL 中的作用，我们编译了健康参与者的 B 细胞和 CLL 患者的 PBMC。与来自健康参与者的 B 细胞相比，CLL 原代细胞中的 PAK1 mRNA 表达水平显着更高。qRT-PCR 数据的 Kaplan-Meier 生存分析证实，PAK1 高表达患者的总生存率显着降低。

　　值得注意的是，IPA-3，一种 PAK1 的小分子抑制剂，导致对依鲁替尼耐药和亲本 CLL 细胞生长的剂量依赖性抑制。

　　此外，IPA-3 和依鲁替尼的组合显示出有效的增殖抑制作用，使用 CompuSyn 软件计算的 CI 证实了组合的协同效应 (CI <1)。

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