接受帕博西尼和他莫昔芬治疗的晚期激素受体阳性乳腺癌患者血浆外泌体的深度蛋白质组学分析

　　在晚期、激素受体 (HR) 阳性、HER2 阴性乳腺癌 (BC) 中，将 CDK4/6 抑制剂 (CDK4/6i) 与内分泌治疗 (ET) 相结合，可使中位无进展生存期加倍，但最终会使耐药性和疾病进展发生。对于大多数患者，耐药机制尚不清楚。外泌体是膜结合的细胞外囊泡，含有脂质、蛋白质和核酸，作为细胞间通讯的一种形式从肿瘤中释放出来。可以从血浆中回收外泌体，对其货物的分析提供了在癌细胞中激活的生物途径的动态读数。血浆外泌体的蛋白质组学分析可能有助于深入了解 CDK4/6i-ET 治疗期间出现的耐药机制。

　　十大癌症研究联盟进行了一项单臂 II 期试验，将帕博西尼加他莫昔芬作为晚期 HR+/HER2- BC 的一线治疗 (NCT02668666)。在基线、疾病进展和研究治疗期间的时间点，从研究参与者 (n = 49) 的 Streck 管中收集全血。血浆在收集后 48 小时内被分离并储存在-80℃。使用市售试剂盒和超速离心法从解冻的血浆中分离外泌体。外泌体提取和纯化针对蛋白质回收进行了优化。纯化的外泌体经过处理用于蛋白质组学分析，并用 TMT10(串联质量标签 10plex)标记，并用 QExactive HF 质谱仪进行定量。超灵敏质谱提供了外泌体蛋白质的深度蛋白质组学覆盖，并检测了各种翻译后修饰 (PTM)。使用改进的 SEQUEST/ProLuCID 数据库搜索引擎和 Percolator 数据过滤工具链，通过我们实验室开发的管道分析数据。在基线、最佳反应和进展时确定外泌体蛋白表达。

　　使用我们的超灵敏蛋白质组学方法，我们从低至 100 ng 的纯化外泌体中检测到 500 多种外泌体蛋白质。在将患者样本与健康供体样本进行比较时，观察到外泌体特异性标志物的显着富集。与之前的报告一样，在 BC 患者样本中观察到表面糖蛋白(例如 CD44)的富集。超灵敏蛋白质组学还检测到 PTM，包括磷酸化、甲基化、氧化、脱酰胺和糖基化。将呈现比较从基线与进展时响应患者收集的样本的差异蛋白质组学和 PTM 谱。

　　我们的创新方法为 CDK4/6i-ET 治疗期间血浆外泌体的蛋白质组学景观提供了无与伦比的描绘。这种强大的方法可以为治疗期间出现的耐药机制提供新的见解。这项研究由辉瑞公司资助。

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