卡博替尼具有很强的抗性

　　卡博替尼具有很强的抗性，在我们已经鉴定的或以前报道的ntrk1抗tki突变中，位于ntrk1酪氨酸激酶结构域n叶内alpha-c螺旋区的突变，可能会通过将亮氨酸替换为阳离子组氨酸残基，使alpha-c螺旋扭曲。l564h对卡博替尼和尼特达尼布表现出较高的抗性，但对entretinib敏感。F646残基相当于alk的f1245，这是维持n叶alpha-c螺旋与c叶(alk的n叶f1174和c叶f1245之间的相互作用，以及ntrk1中l563、l567和f646之间的疏水相互作用所必需的，突变可能削弱了这些残基之间的疏水相互作用。突变体对cabozantinib和ninetdanib有抗性，但对entretinib和ponatinib敏感。

　　有趣的是，ponatinib对f646i的敏感性高于野生型ntrk1。D679g是唯一一个远离atp和药物结合袋，但靠近ntrk1 c叶激活环的耐药突变。预测突变通过影响激活环的结构，改变atp结合袋的构象。D679g突变对cabozantinib和 foretinib 具有抗性，但对entrectinib和loxo-101没有抗性，说明抑制剂的结合方式可能在cabozantinib(或 foretinib)和entrectinib(或loxo-101)之间有所不同。结果表明，这两种化合物的结构相似，都优先与ros1的非活性构象结合，并具有不同于其他ros1-tkis化合物(如克左替尼(40))的载脂蛋白模拟对接结构。G667是保守的dfg基序的下一个，核心基序调节激酶活性，相当于alk和ros1的g2101中的g1269。Alk的p.g1269a突变，在一个对克里佐替尼耐药的alk重排肺癌患者身上发现，在一个entretinib耐药的患者的ctdna中也发现了p.g667c突变。有趣的是，我们发现g667c突变对cabozantinib和foretinib以及ponatinib和ninetdanib有较高的敏感性，甚至比野生型ntrk1更敏感。已报道的人血浆中卡博替尼(cabozantinib)、帕那替尼(ponatinib)和尼特达尼布(nitrib)浓度分别为3ー5mol/l、200和70nmol/l，对g667c突变体的ic50分别为12、7和24nmol/l。

　　然而，卡博替尼和ponatinib具有广泛的血浆蛋白结合(99%以上结合在血浆蛋白上) ，而且人血浆中niterdanib的体外蛋白结合率超过97%。另外，当我们考虑肿瘤萎缩的诱发因素时，重要的是考虑ic70或ic90而不是ic50。体内实验表明，卡博替尼和ponatinib 能抑制表达km12细胞的tpm3-ntrk (wt)的生长。然而，重要的是要仔细评估这些化合物在体内实验中的暴露是否能够达到人体可容忍的剂量。因此，需要进一步研究临床剂量的卡博替尼、波那替尼或尼特达尼布是否能有效抑制ntrk1，特别是g667c突变的ntrk1。

　　在ntrk1、alk或ros1中，甘氨酸残基之后是半胱氨酸，在ckit、pdgffra和flt3中是半胱氨酸，因此，甘氨酸转化为半胱氨酸可能不影响ntrk1的活性，但可能改变ntrk1与其他相关酪氨酸激酶结合区的核心构象。因此，针对其他酪氨酸激酶，如ponatinib和ninetdanib 的独特的tkis，可能对抗抗性突变体比对抗野生型更有效。例如，众所周知，ponatinib能在体外抑制abl kit fgfr flt3和 pdgfra，在我们的研究中，ponatinib对g667c突变体的ic50比野生型ntrk1(41)低10倍。当然，还需要进一步的研究来检验，在人体可达到的浓度下，ponatinib，ninetdanib，或cabozantinib是否能有效抑制 g667c和/或野生型 ntrk1。这些药物也必须在体内进行评估，最终，在临床试验网站上，根据上述突变，g595残基g595r和g595l 的突变，被称为溶剂前沿突变，对我们重点筛选的所有测试的ntrk抑制剂和tkis都表现出了显着的耐药性，除了针对下游通路的抑制剂，如mek抑制剂trametib。G595r突变相当于alk的g1202r和ros1的g2032r。Alk的g1202r突变对lorlatinib 相对敏感，g2032r突变对cabozantinib和foretinib相对敏感。