苯磺酸阿比特龙的代谢和反应受TSPYLs的调节

　　Abiraterone是首个也是唯一的一种FDA批准的CYP17A1抑制剂，与泼尼松联用于治疗mCRPC。Abiraterone被CYP3A4代谢产生非活性N氧化代谢产物。这三个TSPYLs可以诱导CYP17A1表达，导致DHEA水平升高和细胞增殖增加。同时，它们还抑制CYP3A4的表达，可能降低阿比特龙的生物转化。这些观察结果刺激我们测试TSPYLs对阿比特龙代谢和抗癌活性的影响。我们首先测试了TSPYLs对前列腺癌细胞对阿比特龙的应答的作用。如预期的那样，阿比特龙通过抑制CYP17A1来显着抑制细胞增殖。TSPYLs的下调减少了细胞的增殖，可能是CYP17A1表达降低的结果。)。TSPYLs的下调也增加了CYP3A4的表达，导致LNCaP，22Rv1，NCI-H295R和HepaRG细胞的母体药物浓度降低。为了进一步证实这一观察结果，伊曲康唑(ITZ)，一种特定的CYP3A4抑制剂，在阿比特龙治疗期间用于治疗细胞。ITZ的加成恢复从TSPYLs，ITZ与另一种特定的CYP3A4抑制剂酮康唑不同，即使在更高剂量下，它对CYP17A1活性也没有抑制作用。单独使用低浓度的ITZ对细胞增殖没有影响。但是，在具有TSPYL抑制功能的细胞中，与单独使用阿比特龙相比，ITZ与阿比特龙一起显着抑制了细胞增殖。此外，TSPYLs不会影响SULT2A1的表达(数据未显示)。这些结果表明，TSPYLs通过调节主要的阿比特龙代谢酶CYP17A1和CYP3A4的表达来影响阿比特龙的反应。

　　功能分析TSPYL1和TSPYL4的nsSNP

　　TSPYL1，TSPYL2和TSPYL4转录调节CYP，并影响药物反应。接下来，我们确定这三个TSPYL基因中是否存在任何已知的nsSNP，可能会影响其功能和/或影响药物反应。根据1000基因组计划的报告，选择MAF值≥0.10的常见nsSNP进行研究。TSPYL1中的四个nsSNP和TSPYL4中的两个nsSNP符合该标准，并用于功能研究。将包含这六个SNP的变体表达构建体以及野生型(WT)构建体分别转染到HepaRG，NCI-H295R，LnCaP和22Rv1细胞中。

　　在过表达WT和变异构建体的HepaRG细胞中，TSPYL1或TSPYL4中的nsSNP均未显示对TSPYL1或TSPYL4蛋白质水平的显着影响。然而，一个TSPYL1 nsSNP，rs3828743，即导致了P62S氨基酸取代，废除TSPYL1的抑制CYP2C19和CYP3A4的转录，而TSPYL1对CYP17A1的诱导的影响没有被该SNP影响。一致的是，用裂解物TSPYL1抗体从表明细胞过度TSPYL1 WT和变体等位酶进行ChIP分析该TSPYL1P62S导致TSPYL1的损失结合的启动子CYP2C19和CYP3A4，但不CYP2C9和CYP17A1。既不的TSPYL4的nsSNP表明相比于WT时结合上DNA-蛋白质不同影响。

　　还对过表达TSPYL1和TSPYL4的变体和WT表达构建体的NCI-H295R，LNCaP和22Rv1细胞中的CYP3A4和CYP17A1蛋白水平进行了分析。CYP2C9和CYP2C19仅在HepaRG细胞中分析，因为其他细胞系中的内源蛋白水平较低。再次，TSPYL1 P62S废除在这些细胞系CYP3A4水平TSPYL1的调节。所述的无TSPYL4 nsSNP影响CYP3A4和CYP17A1水平的调节。

　　rs3828743 SNP(P62S)取消了阿比特龙代谢酶CYP3A4而不是阿比特龙的靶标CYP17A1转录的TSPYL1调控。这使我们测试了该SNP对阿比特龙的水平和反应的影响。将WT和TSPYL1 P62S表达构建体转染到NCI-H295R，HepaRG，LNCaP和22Rv1细胞中。如预期的那样，与WT相比，变体构建体的过表达对DHEA水平没有差异作用，因为SNP不会影响CYP17A1的转录。然后，我们在相同的四个细胞系中测量了阿比特龙的细胞内水平，过表达了WT和变体同工酶。还确定了两种前列腺癌细胞系的细胞增殖。TSPYL1 WT蛋白的过表达下调了CYP3A4的表达，导致所测试的所有四个细胞系中阿比特龙的浓度均显着增加。WT TSPYL1的过表达也导致细胞对阿比特龙更敏感。但是，与过表达WT蛋白的细胞相比，TSPYL1 P62S的过表达降低了阿比特龙的水平并降低了对阿比特龙的敏感性。我们没有观察到在CYP3A4水平在细胞中过表达的是用阿比特龙治疗用载体，这可能是由于CYP3A4的高内源性表达相比，P62S变体蛋白(的进一步增加，阿比特龙水平，和细胞增殖。这些结果表明，TSPYL1 P62S SNP可能是前列腺癌患者中阿比特龙反应的生物标志物。