劳拉替尼耐药机制的预测及克服非小细胞肺癌耐药性的治疗策略

　　劳拉替尼是一种新型、可逆、强效小分子ALK和ROS1抑制剂，其对ALK已知的耐药突变均具有很强的抑制作用，因而被誉为第3代ALK抑制剂。

　　携带ALK或者ROS1突变的肺癌患者被称为肺癌中的“幸运儿”，因为针对ALK或ROS1突变的靶向药物不仅疗效好，而且选择多。

　　劳拉替尼作用多样且效果强大的药品。

　　而且，由于其血脑屏障通透性高，对发生中枢神经系统转移的非小细胞肺癌可发挥较好的效力。

　　适用于治疗ALK阳性和ROS1阳性晚期NSCLC，FDA授予其突破性疗法和孤儿药地位。

　　简介：ALK在3-5%的NSCLC患者中发现了融合基因。

　　由于所得的ALK融合蛋白可组成性激活引起肿瘤发生的ALK酪氨酸激酶，因此已开发出ALK酪氨酸激酶抑制剂来治疗ALK重排的癌症，目前已临床应用了五种ALK-TKI。

　　现在，艾乐替尼广泛用于一线治疗。但是，由于ALK激酶结构域中的继发突变(例如I1171N或G1202R)，大多数患者会出现艾乐替尼耐药。

　　劳拉替尼，第三代ALK-TKI，已证明能够克服任何较早的ALK-TKI抗性单点突变体，包括G1202R和I1171N。即使劳拉替尼在具有ALK二级突变的第一代或第二代ALK-TKI耐药患者中显示出明显的临床反应，2016年和2018年在临床中发现并报道了多种劳拉替尼抗药性ALK复合突变。

　　但是在大约一半的劳拉替尼耐药病例中，尚未发现这种机制。为了进一步了解劳拉替尼的耐药机制，我们尝试使用细胞系模型和模型来发现劳拉替尼的耐药机制。

　　体内模型，并探索克服耐药性的治疗策略。

　　实验步骤：我们首先使用表达EML4-ALK-G1202R或-I1171N的鼠pro-B Ba / F3细胞进行ENU随机诱变筛选，探索了劳拉替尼耐药性突变。

　　其次，我们在体内建立了对劳拉替尼耐药的肿瘤，并分析了耐药机制。

　　最后，我们通过用高浓度的劳拉替尼(1000 nM或3000 nM)处理，使用TKI初治ALK阳性NSCLC患者衍生的JFCR028-3细胞获得了劳拉替尼耐药细胞。

　　数据摘要：我们从ENU诱变或体内共鉴定了15种具有G1202R或I1171N的劳拉替尼耐药EML4-ALK复合突变抗性模型。

　　我们还发现，这些劳拉替尼耐药的突变中约有一半对第一代或第二代ALK-TKI(如克唑替尼或艾乐替尼)重新敏感。

　　使用计算模拟进行的结构分析成功地预测了这些识别出的化合物突变如何以及为何赋予劳拉替尼抗药性以及对早期TKIs的敏感性的机制。

　　另一方面，在患者样品中发现的EML4-ALK-G1202R + L1196M复合突变对所有临床应用的ALK-TKI均具有抗性。但是我们发现两种BCR-ABL抑制剂AG-957和adaphostin可以直接抑制ALK-G1202R + L1196M。

　　从接受大剂量劳拉替尼治疗的JFCR-028-3细胞中，我们在药物治疗3个月后独立建立了劳拉替尼(1000 nM或3000 nM)耐药细胞。

　　那些已建立的对劳拉替尼耐药(LR)的细胞的生长不受洛拉替尼以及其他ALK-TKI的抑制，并且它们在ALK激酶结构域中没有突变。

　　因此，我们假设除ALK外还激活了旁路途径，并在药理上探索了对劳拉替尼的耐药机制。

　　结果，我们发现了几种药物，例如达沙替尼使LR细胞对劳拉替尼重新敏感。

　　结论：我们的结果表明，使用活检或液体活检对劳拉替尼耐药后的临床序列可能为选择有效的序贯ALK-TKI疗法提供重要信息。

　　仍需要进一步的研究以发现未知的劳拉替尼耐药机制。

　　推测ALK以外的旁路途径的激活，并在药理上探索了对劳拉替尼的耐药机制。